中華人民共和國衛(wèi)生檢疫總所關(guān)于印發(fā)《國境衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)方法》和《國境衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)規(guī)程》(試行)的通知
衛(wèi)檢總監(jiān)字〔1989〕第235號 1989年12月6日)
各衛(wèi)生檢疫所:
為加強(qiáng)國境衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)工作,使其科學(xué)化、規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化,我們組織有關(guān)專業(yè)人員,整理了《國境衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)方法》和制定了《國境衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)規(guī)程》(試行),現(xiàn)發(fā)給你們參照執(zhí)行。望總結(jié)經(jīng)驗(yàn)并將執(zhí)行過程中遇到的問題和改進(jìn)意見及時(shí)報(bào)總所。
國境衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)方法
目錄
一、健康檢查檢驗(yàn)方法
(一)ABO血型檢驗(yàn)方法
(二)谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢驗(yàn)方法
(三)乙肝表面抗原檢驗(yàn)方法
(四)食品飲用水從業(yè)人員帶菌檢查檢驗(yàn)方法
(五)腹瀉病病原體檢驗(yàn)方法
(六)紅細(xì)胞沉降率檢驗(yàn)方法
二、禁止入境的傳染病檢驗(yàn)方法
(一)梅毒血清抗體檢驗(yàn)方法
(二)淋病雙球菌檢驗(yàn)方法
(三)結(jié)核桿菌檢驗(yàn)方法
(四)麻瘋桿菌檢驗(yàn)方法
(五)艾滋病血清抗體檢驗(yàn)方法(HIV檢驗(yàn)方法)
三、檢疫傳染病檢驗(yàn)方法
(一)鼠疫耶爾森氏菌檢驗(yàn)方法
(二)霍亂弧菌檢驗(yàn)方法
(三)黃熱病病毒檢驗(yàn)方法
四、監(jiān)測傳染病檢驗(yàn)方法
(一)流感病毒檢驗(yàn)方法
(二)瘧原蟲檢驗(yàn)方法
(三)斑疹傷寒立克次體檢驗(yàn)方法
(四)回歸熱螺旋體檢驗(yàn)方法
(五)登革熱病毒檢驗(yàn)方法
(六)流行性出血熱病毒檢驗(yàn)方法
(七)脊髓灰質(zhì)炎病毒檢驗(yàn)方法
(八)天花病毒檢驗(yàn)方法
(九)埃波拉馬爾堡病毒檢驗(yàn)方法
(十)拉沙熱病毒檢驗(yàn)方法
(十一)軍團(tuán)菌檢驗(yàn)方法
五、食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法和標(biāo)準(zhǔn)(詳見《中華人民共和國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》)
(一)糧食衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(二)食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(三)鮮肉衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(四)凍肉衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(五)咸肉衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(六)熟肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(七)鮮蛋衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(八)加工蛋制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(九)乳及乳制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十)茶類衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十一)糖類衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十二)糕點(diǎn)、餅干、面包衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十三)冷飲食品及汽酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十四)罐頭衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十五)水產(chǎn)品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十六)調(diào)味品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十七)醬腌菜衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十八)豆制品及淀粉類衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十九)蒸餾酒及配制酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(二十)發(fā)酵酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(二十一)食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(二十二)食品中氟允許量標(biāo)準(zhǔn)
(二十三)食品中鎘允許量標(biāo)準(zhǔn)
(二十四)食品總砷、無機(jī)砷允許量標(biāo)準(zhǔn)
(二十五)食品中汞允許量標(biāo)準(zhǔn)
(二十六)糧食、蔬菜、肉、蛋等食品中“六六六”、“滴滴涕”衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(二十七)食品中甲拌磷、希螟硫磷、倍硫磷殘留量衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(二十八)食品中敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對硫磷允許殘留標(biāo)準(zhǔn)
(二十九)食品中黃曲霉毒素B1允許量標(biāo)準(zhǔn)
(三十)熏烤動物性食品中苯并芘允許限量標(biāo)準(zhǔn)
(三十一)食具容器包裝材料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
六、餐茶具衛(wèi)生檢驗(yàn)方法
七、生活飲用水衛(wèi)生要求
八、食品貯藏衛(wèi)生要求
九、環(huán)境衛(wèi)生要求
(一)污水排放衛(wèi)生要求
(二)空氣衛(wèi)生要求
(三)餐茶具洗滌消毒衛(wèi)生要求
(四)供水設(shè)備衛(wèi)生要求
一、健康檢查檢驗(yàn)方法
(一)ABO血型檢驗(yàn)方法
1、方法
玻片凝集法
標(biāo)準(zhǔn)血清系指用抗A抗B單克隆標(biāo)準(zhǔn)抗血清
2、結(jié)果判定
────────────┬───────────────────────
標(biāo)準(zhǔn)血清 │ 凝集現(xiàn)象
────────────┼───────────────────────
抗A │+ - ?。 。?/p>
抗B │- ?。 。 。?/p>
受檢者血型 │A B AB O
────────────┴───────────────────────
?。。撸撸撸撸撸撸撸撸撸撸撸撸摺?-不凝集
────────────────────────────────────
(二)谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢驗(yàn)方法
1 方法
GPT賴氏法
2 結(jié)果判定
────────────┬───────────────────────
方法 │正常值
────────────┼───────────────────────
賴氏法 │0-25單位
────────────┴───────────────────────
(三)乙型肝炎表面抗原檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
1.2 反向間接血凝反應(yīng)(RPHA)
2 結(jié)果判定
───┬────────────────────┬───────────
方法 │ 血球凝集反應(yīng) │
├────────────────────┤結(jié)果判定
│1:2 1:4 1:8 1:8以上│
───┼────────────────────┼───────────
反向間│++↑ ++↑ ?。?uarr; ++↑ │陽性(++)
接血凝│++↑ ?。?uarr; ?。?uarr; +↓ │可疑(+-)
反應(yīng) │++↑ ?。?uarr; +↓ ?。 々﹃幮裕ǎ?/p>
───┴────────────────────┴───────────
+凝集 ↑以上 ↓以下
必要時(shí)作中和試驗(yàn)
────────┬────────────────┬──────────
方法 │ 判定方法 │結(jié)果判定
────────┼────────────────┼──────────
酶聯(lián)免吸附試驗(yàn) │目測:棕黃色 │陽性
│比色: │≥2.1:陽性
│ 樣品OD值 │<2.1:陰性
│PN=─────────────│
│ 陰性對照平均OD值 │
────────┴────────────────┴──────────
(四)食品飲用水從業(yè)人員帶菌檢查檢驗(yàn)方法
1 項(xiàng)目
霍亂弧菌、志賀氏菌、沙門氏菌
2 方法
增菌,分離培養(yǎng),生化學(xué)、血清學(xué)鑒定
3 結(jié)果
不得檢出
(五)腹瀉病病原體檢驗(yàn)方法
1 項(xiàng)目
霍亂弧菌、志賀氏菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌、致病性大腸桿菌、侵襲性大腸桿菌、產(chǎn)毒性大腸桿菌、空腸彎曲菌、結(jié)腸炎耶爾森氏菌、輪狀病毒
2 方法
增菌、分離、培養(yǎng)、鑒定
3 結(jié)果
檢出××病原體;××病原體未檢出。
(六)紅細(xì)胞沉降率檢驗(yàn)方法
1 方法
魏氏法
2 結(jié)果判定
────────┬───────────────────────────
方法 │正常檢驗(yàn)指標(biāo)
────────┼───────────────────────────
魏氏法 │男性 0-15mm/H
│女性 0-20mm/H
────────┴───────────────────────────
二、禁止入境的傳染病檢驗(yàn)方法
(一)梅毒血清抗體檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 血清反應(yīng)素試驗(yàn)(USR)
1.2 梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)(TPHA)
1.3 熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)(FTA-ABS)
2 結(jié)果判定
2.1 USR
────────────────────────────────────
反應(yīng)程度 結(jié)果判定
────────────────────────────────────
中等或大的塊狀物 陽性反應(yīng)(++)↑
顆粒不規(guī)則細(xì)小粒狀 弱陽性反應(yīng)(+-)
均勻分布無塊狀物 陰性反應(yīng)(-)
────────────────────────────────────
2.2 TPHA
────────────────────────────────────
陽性 ?。?:80
可疑 1:80(+-)需復(fù)驗(yàn)
陰性 <1:80
────────────────────────────────────
2.3 FTA-ABS
────────────────────────────────────
熒光強(qiáng)度 結(jié)果判定
────────────────────────────────────
翠綠色熒光(++)↑ 陽性
黃綠色熒光(+) 可疑
熒光不顯(+-) 陰性
────────────────────────────────────
健康檢查USR陽性時(shí),需做TPHA,陽性時(shí)才能確診。
(二)淋病雙球菌檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 直接涂片染色鏡檢
1.2 分離培養(yǎng)
1.3 生化試驗(yàn)鑒定
2 結(jié)果判定
2.1 形態(tài)特點(diǎn):卵圓形或圓形,成對排列常位于細(xì)胞中。
2.2 菌落半透明灰白色邊緣花瓣?duì)睢?/p>
2.3 生化試驗(yàn):過氧化氫酶,氧化酶陽性葡萄糖產(chǎn)酸即可判定。
(三)結(jié)核桿菌檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 直接涂片抗酸染色鏡檢
1.2 分離培養(yǎng)
1.3 動物試驗(yàn)
2 結(jié)果判定
2.1 檢出抗酸性菌。
2.2 3-4周生長粗糙型菌落為陽性。
2.3 動物試驗(yàn)3-4周接種部位附近淋巴結(jié)腫大為陽性。
(四)麻瘋桿菌檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 直接涂片抗酸染色鏡檢100個(gè)視野
1.2 動物試驗(yàn)
1.3 麻瘋菌素反應(yīng)
2 結(jié)果判定
2.1 鏡檢結(jié)果
2.1.1 陰性(-):檢查100個(gè)視野無麻瘋桿菌。
2.1.2 陽性(+):每個(gè)視野查到1個(gè)或<1個(gè)麻瘋桿菌。
2.1.3 陽性(++):每個(gè)視野均可查到麻瘋桿菌。
2.1.4 陽性(+++):每個(gè)視野均可查到許多麻瘋桿菌。
2.2 動物試驗(yàn):豚鼠接種不發(fā)病。
2.3 麻瘋菌素反應(yīng):出現(xiàn)紅斑>10mm為陽性。
(五)艾滋病血清抗體檢驗(yàn)方法
1 項(xiàng)目
HIV抗體檢測
2 方法
2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
2.2 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
2.3 明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)
2.4 蛋白印跡試驗(yàn)(WB)
3 結(jié)果判定
3.1 ELISA:OD值≥cOT OFF值表示有反應(yīng),應(yīng)復(fù)驗(yàn)1次,如重復(fù)陽性,可認(rèn)為HIV抗體陽性。
3.2 IFA:細(xì)胞漿和細(xì)胞膜呈綠色熒光為陽性。
3.3 PA:
────────────────────────────────────
陽性(+) 1:32 發(fā)生顆粒凝集
可疑(+-) ?。?:32 顆粒凝集不顯
陰性(-) 均不發(fā)生凝集反應(yīng)
────────────────────────────────────
3.4 WB:出現(xiàn)P24或GP41帶形,同時(shí)出現(xiàn)其他帶形,為陽性,即可確診。
三、檢疫傳染病檢驗(yàn)方法
(一)鼠疫耶爾森氏菌檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 涂片鏡檢
1.2 分離培養(yǎng)鑒定
1.3 噬菌體試驗(yàn)
1.4 動物試驗(yàn)
1.5 沉淀反應(yīng)
1.6 被動血凝試驗(yàn)
1.7 反向血凝試驗(yàn)
1.8 抗體中和試驗(yàn)
1.9 免疫熒光檢查
2 結(jié)果報(bào)告
2.1 初報(bào):2小時(shí)內(nèi)涂片染色報(bào)告。
2.2 疑似報(bào)告:36小時(shí)內(nèi)報(bào)告形態(tài)、血清學(xué)試驗(yàn)、噬菌體試驗(yàn)結(jié)果。
2.3 最終報(bào)告:初發(fā)鼠疫于72小時(shí)內(nèi)經(jīng)四步檢查結(jié)果報(bào)告。
(二)霍亂弧菌檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 涂片、染色
1.2 動力觀察及制動試驗(yàn)
1.3 分離培養(yǎng)
1.4 生化試驗(yàn)
1.5 血清學(xué)試驗(yàn)
1.5.1 玻片凝集試驗(yàn)
1.5.2 試管定量凝集試驗(yàn)
1.6 噬菌體試驗(yàn)
2 結(jié)果報(bào)告
2.1 初報(bào):涂片形態(tài)動力觀察制動試驗(yàn)2小時(shí)內(nèi)報(bào)告。
2.2 疑似報(bào)告:增菌培養(yǎng)狀況,玻片凝集試驗(yàn)10小時(shí)內(nèi)報(bào)告。
2.3 初步鑒定:結(jié)合形態(tài)、培養(yǎng)性狀,18小時(shí)內(nèi)報(bào)告。
2.4 確定報(bào)告:根據(jù)鑒定試驗(yàn)、鑒別試驗(yàn),48小時(shí)內(nèi)報(bào)告。
(三)黃熱病病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 病毒分離
1.1.1 動物接種
1.1.2 雞胚接種
1.1.3 組織培養(yǎng)
1.2 血清學(xué)試驗(yàn)
1.2.1 抗體中和試驗(yàn)
1.2.2 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)
1.2.3 血凝及血凝抑制試驗(yàn)
1.3 病理組織切片
2 結(jié)果判定
2.1 初步鑒定報(bào)告:動物試驗(yàn),血清學(xué)試驗(yàn)呈陽性反應(yīng),中和指數(shù)>50。雙份血清滴度增高4倍以上。
2.2 最終確定報(bào)告:分離病毒,傳代實(shí)驗(yàn)動物的血清學(xué)試驗(yàn)及病理組織學(xué)切片檢查結(jié)果。
四、監(jiān)測傳染病檢驗(yàn)方法
(一)流感病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 病毒分離
1.1.1 雞胚接種
1.1.2 組織培養(yǎng)
1.2 血清學(xué)試驗(yàn)
1.2.1 血凝及血凝抑制試驗(yàn)
1.2.2 紅細(xì)胞吸附及吸附抑制試驗(yàn)
1.2.3 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)
1.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
1.3 免疫熒光抗體快速診斷
2 結(jié)果判定
2.1 快速診斷:直接涂片熒光染色,熒光細(xì)胞3個(gè)以上為陽性,1至2個(gè)為可疑,無特異熒光為陰性。
2.2 分離出病毒,用已知標(biāo)準(zhǔn)免疫血清確定甲、乙、丙三型和亞型。
2.3 血清學(xué)試驗(yàn):雙份血清抗體滴度比增長4倍為陽性。ELISA雙份血清滴度比增長4倍為陽性。ELISA雙份血清滴度比值的負(fù)對數(shù)ED值>0.5為陽性,<0.1為陰性。
(二)瘧原蟲檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 涂片鏡檢
1.2 血清學(xué)試驗(yàn)
1.2.1 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)
1.2.2 被動血凝試驗(yàn)
1.2.3 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
1.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
2 結(jié)果判定
2.1 涂片找到各期瘧原蟲,應(yīng)報(bào)告發(fā)育時(shí)期及瘧原蟲的種類。
2.2 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)形成白色沉淀線為陽性。
2.3 標(biāo)準(zhǔn)瘧原蟲抗原致敏血球,與被測血清所凝集為陽性。
2.4 免疫熒光陽性:呈明亮熒光。
2.5 ELISA陽性:形成復(fù)合物而顯黃棕色。
(三)斑疹傷寒立克次氏體檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 直接檢查法
1.1.1 姬氏染色法
1.1.2 免疫熒光染色
1.2 病原體分離
1.2.1 豚鼠接種
1.2.2 雞胚接種
1.3 血清學(xué)試驗(yàn)
1.3.1 外斐氏反應(yīng)
1.3.2 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)
1.3.3 間接血凝試驗(yàn)
1.3.4 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
2 結(jié)果判定
2.1 鏡檢:立克次體短小、單個(gè)、成雙或成堆紅色,熒光染色呈黃綠色熒光。
2.2 豚鼠呈發(fā)熱反應(yīng),直接檢查可查立克次體,臟器懸液為抗原做血清反應(yīng),呈陽性。
2.3 雞胚卵黃囊膜涂片,可查出立克次體。
2.4 血清學(xué)試驗(yàn):雙份血清滴度增高4倍以上為陽性。外斐氏反應(yīng)>1:160有診斷意義,補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)>1:8,間接血凝試驗(yàn)>1:400,間接免疫熒光試驗(yàn)呈綠色熒光顆粒為陽性。
(四)回歸熱螺旋體檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 直接檢查
1.2 染色鏡檢
1.3 動物接種
1.4 雞胚接種
2 結(jié)果判定
───────────┬────────────────────────
方法 │ 結(jié)果判定
───────────┼────────────────────────
鏡檢 │發(fā)現(xiàn)有柔軟長絲狀,具有5-7個(gè)不規(guī)則疏松螺旋體
雞胚或動物接種 │發(fā)現(xiàn)有螺旋體生長
───────────┴────────────────────────
(五)登革熱病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 病毒分離
1.1.1 乳鼠接種
1.2 中和試驗(yàn)
1.3 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)
1.4 血凝抑制試驗(yàn)
2 結(jié)果判定
────────┬───────────────────────────
方法 │ 結(jié)果判定
────────┼───────────────────────────
中和試驗(yàn) │單份血清中和指數(shù)>50為陽性
補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) │效價(jià)≥1:32為陽性,恢復(fù)期血清比急性期血清增長4倍。
血凝抑制試驗(yàn) │效價(jià)≥1:2560為陽性,恢復(fù)期比急性期血清增長4倍。
────────┴───────────────────────────
(六)流行性出血熱檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 間接免疫熒光試驗(yàn)
1.2 血凝抑制試驗(yàn)
2 結(jié)果判定
2.1 間接免疫熒光:血清滴加抗原片上出現(xiàn)翠綠色熒光顆粒為陽性。
(七)脊髓灰質(zhì)炎病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 病毒分離
1.1.1 動物接種
1.1.2 組織培養(yǎng)
1.2 血清學(xué)試驗(yàn)
1.2.1 中和試驗(yàn)
1.2.2 ELISA
1.3 免疫熒光法快速診斷
2 結(jié)果判定
2.1 小白鼠接種:出現(xiàn)典型癥狀或有規(guī)律死亡為陽性。
2.2 組織培養(yǎng):病變(++)細(xì)胞>50%為陽性。
2.3 中和試驗(yàn):雙份血清滴度增長4倍。
2.4 ELISA:界限值P/N>2為陽性。
2.5 快速診斷:DFA:陽性時(shí)胞漿中呈彌散性翠綠色熒光,部分顆粒性,有的呈大球形熒光包涵體。
(八)天花病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 涂片鏡檢
1.2 病毒分離
1.2.1 雞胚接種
1.2.2 動物試驗(yàn)
1.3 血清學(xué)試驗(yàn)
1.3.1 絮狀沉淀試驗(yàn)
1.3.2 血凝抑制試驗(yàn)
1.3.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
2 結(jié)果判定
2.1 鏡檢:天花病毒原生小體大量存在,判定為陽性。
2.2 雞胚接種:痘斑試驗(yàn)陽性,絨毛尿囊膜有白點(diǎn)病灶。
2.3 動物試驗(yàn):鮑氏試驗(yàn)陽性,家兔角膜吳透明小圓泡炎癥變化。
2.4 血清學(xué)試驗(yàn):雙份血清滴度增高4倍,絮狀沉淀試驗(yàn):呈現(xiàn)絮狀沉淀為陽性。
(九)埃波拉馬爾堡病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 病毒分離
1.1.1 動物接種
1.1.2 組織培養(yǎng)
1.2 血清學(xué)試驗(yàn)
1.2.1 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
2 結(jié)果判定
2.1 動物試驗(yàn):小白鼠、豚鼠、猴皆能發(fā)病。
2.2 VERO單層細(xì)胞:陽性時(shí)細(xì)胞病變病毒生長。
2.3 IFA:血清抗體陽性,出現(xiàn)翠綠色熒光顆粒。
2.4 ELISA:界限值P/N>2為陽性。
(十)拉沙熱病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 病毒分離
1.1.1 動物接種
1.1.2 組織培養(yǎng)
1.2 血清學(xué)試驗(yàn)
1.2.1 中和試驗(yàn)
1.2.2 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
1.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
2 結(jié)果判定
2.1 動物試驗(yàn):小白鼠4日后發(fā)病死亡。
2.2 組織培養(yǎng):VERO-E6細(xì)胞產(chǎn)生病變,單個(gè)細(xì)胞壞死,分布不均,呈巢穴狀。
2.3 中和試驗(yàn):小白鼠中和指數(shù)<9為陰性,>50為陽性。雙份血清明顯增長。蝕斑抑制中和試驗(yàn):蝕斑減少>80%為陽性。
2.4 IFA:陽性時(shí)在細(xì)胞漿內(nèi)呈點(diǎn)狀顆粒狀熒光,或分布在核內(nèi)。
2.5 ELISA:界限值P/N>2為陽性。
(十一)軍團(tuán)菌檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 涂片鏡檢
1.2 分離培養(yǎng)
1.3 動物接種
1.4 血清學(xué)試驗(yàn)
1.4.1 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
1.4.2 微量凝集試驗(yàn)(MAT)
1.4.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
2 結(jié)果判定
2.1 姬美耐染色:菌體為紅色,鍍銀染色呈黑棕色,多形性桿菌狀,多數(shù)在吞噬細(xì)胞內(nèi)。DFA染色呈亮綠熒光。
2.2 CO2中培養(yǎng)5天,灰白、濕潤、有光澤、質(zhì)軟菌落,產(chǎn)褐色素,明膠液化,水解馬尿酸,氧化酶陽性。
2.3 血清學(xué)試驗(yàn):雙份血清呈4倍增長,≥1:128為陽性,MAT抗體滴度>1:16為陽性。ELISA校正OD值≥0.3為陽性。
六、餐茶具衛(wèi)生檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 濾紙貼附法
1.2 生理鹽水洗滌、涂擦法
2 項(xiàng)目與指標(biāo)
────────────┬───────────────────────
項(xiàng)目 │ 指標(biāo)
────────────┼───────────────────────
細(xì)菌總數(shù) │<20個(gè)/平方厘米
大腸菌群 │不得檢出/50平方厘米
────────────┴───────────────────────
七、生活飲用水衛(wèi)生要求
1 項(xiàng)目
1.1 感官性狀
1.2 細(xì)菌學(xué)檢查
1.3 理化檢查
2 水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)和衛(wèi)生要求
────────────┬───────────────────────
項(xiàng)目 │ 標(biāo)準(zhǔn)
────────────┼───────────────────────
1.感官性狀和一般化學(xué) │
指標(biāo): │
色 │色度不超過15度,并不得呈現(xiàn)其它異色
混濁度 │不超過3度,特殊情況不超過5度
溴和味 │不得有異嗅、異味
肉眼可見物 │不得含有
PH │6.5-8.5
總硬度 │450mG/L
?。ㄒ蕴妓徕}計(jì)) │
鐵 │0.3mG/L
錳 │0.1mG/L
銅 │1.0mG/L
鋅 │1.0mG/L
揮發(fā)酚類 │0.002mG/L
(以苯酚計(jì)) │
陽離子合成洗滌劑 │0.3mG/L
硫酸鹽 │250mG/L
氯化物 │250mG/L
溶解性總固體 │1000mG/L
2.毒理學(xué)指標(biāo): │
氟化物 │1.0mG/L
氰化物 │0.05mG/L
砷 │0.05mG/L
硒 │0.01mG/L
汞 │0.001mG/L
鎘 │0.01mG/L
鉻(六價(jià)) │0.05mG/L
鉛 │0.05mG/L
銀 │0.05mG/L
硝酸鹽(以氮計(jì)) │20mG/L
氯仿 │60UG/L
四氯化碳 │3UG/L
苯并(A)芘 │0.01UG/L
滴滴涕 │1UG/L
六六六 │5UG/L
3.細(xì)菌學(xué)指標(biāo): │
細(xì)菌總數(shù) │小于100個(gè)/mL
總大腸菌群 │小于3個(gè)/L
游離余氯 │末梢水不應(yīng)低于0.05mG/L在接觸30分鐘
│后不低于0.3mG/L
4.放射性指標(biāo): │
總α放射性 │0.1Bq/L
總β放射性 │1Bq/L
────────────┴───────────────────────
八、食品貯藏衛(wèi)生要求
1 項(xiàng)目
1.1 溫度
1.2 濕度
2 溫、濕度指標(biāo)
────────────┬───────────────────────
項(xiàng)目 │ 指標(biāo)
────────────┼───────────────────────
冷凍食品:溫度 │-10―-12℃
相對濕度 │85%-92%
魚肉暫存:溫度 │0-3℃
相對濕度 │85%-88%
蛋品:溫度 │1-3℃
相對濕度 │85%-88%
水果、蔬菜:溫度 │7-10℃
相對濕度 │85%-95%
牛乳 │5-7℃
糧油干貨 │陰涼干燥,溫度最高允許28℃
消毒后食品,開罐食品、 │5-7℃
牛乳及熟食品 │
────────────┴───────────────────────
九、環(huán)境衛(wèi)生檢驗(yàn)要求
(一)污水排放衛(wèi)生要求
────────────┬───────────────────────
項(xiàng)目 │ 指標(biāo)
────────────┼───────────────────────
五日生化需氧量 │ ≤ 50
懸浮物 │ ≤ 150
大腸菌群 │ ≤ 250個(gè)/100mL
────────────┴───────────────────────
(二)空氣衛(wèi)生要求
────────────────────────────────────
項(xiàng)目 指標(biāo)
────────────────────────────────────
二氧化碳(mG/立方米) ≤0.15
一氧化碳(mG/立方米) ≤10
細(xì)菌總數(shù)(個(gè)/立方米)
夏季 ≤4500
冬季 ≤6000
甲、乙鏈球菌(個(gè)/立方米) ≤36
────────────────────────────────────
(三)餐茶具洗滌消毒衛(wèi)生要求
────────────────────────────────────
項(xiàng)目 指標(biāo)
────────────────────────────────────
蒸汽柜溫度 77℃ 15分
91℃ 5分
洗滌熱水溫度 >77℃
洗手水溫度 43-49℃
────────────────────────────────────
(四)供水設(shè)備衛(wèi)生要求
每月消毒一次,游離余氯0.2PPm,不少于20分。
國境衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)規(guī)程
(試行)
一、檢驗(yàn)工作任務(wù)和內(nèi)容
檢驗(yàn)工作是衛(wèi)生檢疫一項(xiàng)技術(shù)性很強(qiáng)的工作。其主要任務(wù)是:為檢疫查驗(yàn)、傳染病監(jiān)測、衛(wèi)生監(jiān)督、衛(wèi)生處理、隔離、留驗(yàn)、醫(yī)療急救等工作及時(shí)、準(zhǔn)確地提供檢驗(yàn)結(jié)果和監(jiān)測數(shù)據(jù),為衛(wèi)生檢疫工作提供科學(xué)依據(jù)。
檢驗(yàn)工作的主要內(nèi)容:
(一)負(fù)責(zé)現(xiàn)場樣品采集工作,及時(shí)檢驗(yàn),報(bào)告檢驗(yàn)結(jié)果以及簽發(fā)檢驗(yàn)單證。
(二)對檢疫傳染病和監(jiān)測傳染玻救各種病原體微生物進(jìn)行分離和鑒定。
(三)地國境口岸和入出境交通工具上的食品、飲用水進(jìn)行細(xì)菌學(xué)和理化檢驗(yàn)。
(四)負(fù)責(zé)國境口岸的醫(yī)學(xué)動物所帶病原體的分離和鑒定。
(五)負(fù)責(zé)健康檢查的檢驗(yàn)工作。
(六)負(fù)責(zé)國境口岸的醫(yī)療急救及門診的臨床檢驗(yàn)工作。
(七)負(fù)責(zé)進(jìn)口食品檢驗(yàn)工作。
(八)開展有關(guān)疾病監(jiān)測、衛(wèi)生監(jiān)督和衛(wèi)生處理等科學(xué)研究工作。
二、實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度
(一)微生物實(shí)驗(yàn)室
1.設(shè)無菌接種室、培養(yǎng)基制作室、洗滌消毒室、微生物檢查室等。
2.室內(nèi)光線要充足,空氣流通,溫、濕度適宜,安靜清潔,無蚊、無蠅。
3.實(shí)驗(yàn)室出入口放置腳擦墊,用消毒液浸泡,進(jìn)入室內(nèi)必須穿白大衣,戴白帽,換拖鞋,作好自身防護(hù)。
4.遵守各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程,操作危險(xiǎn)活菌應(yīng)在固定地點(diǎn)進(jìn)行,臺面要鋪好浸泡消毒溢的紗布墊,工作完畢將紗布墊浸泡在消毒液中,并消毒洗手。
5.吸取標(biāo)本必須用有橡皮吸頭、塞有棉花的無菌吸管,用過的吸管放在消毒液中。
6.用過的染菌器材和污物經(jīng)滅菌處理后,方可遺棄。
7.打破染菌器材時(shí),應(yīng)迅速采取適當(dāng)消毒措施,對污染點(diǎn)進(jìn)行消毒,并向領(lǐng)導(dǎo)報(bào)告。
8.需要保留的菌種,應(yīng)按菌種保管要求妥善保存。不得隨意送出。
(二)強(qiáng)毒菌檢驗(yàn)室
1.強(qiáng)毒菌檢驗(yàn)室,應(yīng)有嚴(yán)格的防鼠、防蚤設(shè)施。
2.強(qiáng)毒菌檢驗(yàn)必須雙人操作,檢驗(yàn)人員要穿好防護(hù)服裝。
3.已知毒菌種的動物接種、解剖或菌種密封,檢驗(yàn)人員要戴有機(jī)玻璃面罩或眼鏡。
4.工作完畢后,檢驗(yàn)人員必須做終末消毒,方準(zhǔn)離開實(shí)驗(yàn)室。
(三)病毒檢驗(yàn)室
1.設(shè)有隔離的實(shí)驗(yàn)室,一切有污染性的實(shí)驗(yàn)應(yīng)在指定實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。
2.進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿工作服、換鞋。操作中所用材料和器械必須就地進(jìn)行消毒處理,實(shí)驗(yàn)完畢作終末消毒后,方準(zhǔn)離開實(shí)驗(yàn)室。
3.實(shí)驗(yàn)室必須安裝紫外線消毒設(shè)備,實(shí)驗(yàn)前后均用紫外線照射30分鐘以上。
4.發(fā)生病毒污染時(shí),立即采取有效措施進(jìn)行處理,并向領(lǐng)導(dǎo)匯報(bào)。
(四)理化檢驗(yàn)室
1.設(shè)化學(xué)分析室、儀器分析室、秤量室等。要求清潔整齊,溫、濕度適宜。
2.定量器材在使用前應(yīng)按規(guī)定進(jìn)行清洗、校正,試劑的純度符合檢驗(yàn)要求。
3.劇毒、易燃、易爆品應(yīng)專人保管,防止發(fā)生事故。
4.要嚴(yán)格按操作規(guī)程使用儀器,定期對儀器進(jìn)行維修檢查。
5.測定樣品時(shí),必須做平等實(shí)驗(yàn),取平均值計(jì)算報(bào)告。
(五)臨床檢驗(yàn)室
1.室內(nèi)保持清潔安靜。操作嚴(yán)肅認(rèn)真,按操作規(guī)程進(jìn)行。
2.采血時(shí),要態(tài)度和藹,動作輕快,注意安全。
3.檢驗(yàn)報(bào)告,應(yīng)按規(guī)定時(shí)間發(fā)出。急診報(bào)告優(yōu)先發(fā)出。
4.發(fā)現(xiàn)重要意義的檢驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)立即通知體檢工作人員,以便及時(shí)處理,并向領(lǐng)導(dǎo)匯報(bào)。
(六)免疫檢驗(yàn)室
1.室內(nèi)光線充足,溫、濕度適宜,有足夠電源插座。
2.實(shí)驗(yàn)應(yīng)選擇特異性強(qiáng)、靈敏度高的特異性診斷血清、試劑盒的方法。
3.血清、免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)存在多種干擾因素,易出現(xiàn)假陽性,必要時(shí)進(jìn)行復(fù)驗(yàn)
,并進(jìn)一步做確證實(shí)驗(yàn)。
4.洗滌血球一定要洗滌三次。血球上清液不得有溶血跡象,補(bǔ)體使用時(shí)在做正式實(shí)驗(yàn)同時(shí),必須做補(bǔ)體效價(jià)滴定。
5.實(shí)驗(yàn)用的玻璃器材需仔細(xì)選擇,選用中性、硬質(zhì)玻璃器材,能耐酸、耐高溫、透明度強(qiáng),以利于觀察結(jié)果。
(七)動物實(shí)驗(yàn)室
1.實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)由專職人員進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)、繁殖。室內(nèi)應(yīng)保持清潔整齊和適宜溫、濕度,無鼠、無蚊、無蠅。
2.選擇符合實(shí)驗(yàn)要求的純種、健康動物,進(jìn)行單獨(dú)飼養(yǎng),嚴(yán)格消毒,隔離及檢疫。
3.動物實(shí)驗(yàn)必須按照實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程或?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行。
4.實(shí)驗(yàn)動物要進(jìn)行分組編號,標(biāo)記在不易脫落、明顯的部位。實(shí)驗(yàn)動物用的容器應(yīng)有明顯的標(biāo)簽,每天核對動物數(shù)目,如有減少,查明原因并及時(shí)處理。
5.實(shí)驗(yàn)用過的動物,不準(zhǔn)放回動物飼養(yǎng)室。
(八)病媒昆蟲實(shí)驗(yàn)室
1.設(shè)飼養(yǎng)室和標(biāo)本制作鑒定室,室內(nèi)應(yīng)有嚴(yán)格的防鼠、防蚤措施,防止其他昆蟲侵入室內(nèi)。
2.飼養(yǎng)室應(yīng)設(shè)有恒溫、恒濕裝置。備有遮光用的黑布窗簾。飼養(yǎng)器應(yīng)充足,固定專用。
3.飼養(yǎng)室有給水設(shè)備,給水必須隔夜脫氯,但不能超過兩天以上,殺蟲劑及其他揮發(fā)性藥物均不得攜入飼養(yǎng)室內(nèi)。
4.要詳細(xì)填寫飼養(yǎng)記錄,并注明飼養(yǎng)條件。
5.標(biāo)本制作鑒定室應(yīng)溫度適宜、干燥,光線充足。標(biāo)本有防霉、防蟲措施。定期檢查標(biāo)本情況。
(九)毒理實(shí)驗(yàn)室
1.室內(nèi)應(yīng)清潔整齊,無蠅、無鼠,發(fā)現(xiàn)鼠類禁用毒餌除鼠。進(jìn)入室內(nèi)要穿工作服。
2.實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)選擇標(biāo)準(zhǔn)動物,選用標(biāo)準(zhǔn)飼料。一次實(shí)驗(yàn)用全程飼料,備齊后方可開始實(shí)驗(yàn)。
3.應(yīng)按實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行毒理學(xué)實(shí)驗(yàn),選用的方法靈敏、可靠。
4.實(shí)驗(yàn)動物容器應(yīng)備有卡片,標(biāo)明編號、分類編目、記錄進(jìn)程和實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。
5.實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)按有標(biāo)準(zhǔn)毒物、無標(biāo)準(zhǔn)毒物及未知毒物等分類,認(rèn)真觀察,每天詳細(xì)填寫實(shí)驗(yàn)記錄。
6.毒理實(shí)驗(yàn)樣品應(yīng)注意驗(yàn)收、保存和使用。樣品中不得混有化學(xué)藥物和防腐劑。易變質(zhì)樣品應(yīng)及時(shí)冰凍、冷藏保存。
三、檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程
(一)檢驗(yàn)人員的管理
1.檢驗(yàn)工作是科學(xué)性很強(qiáng)的工作,從事檢驗(yàn)工作的人員要具有一定的政治和業(yè)務(wù)素質(zhì)及認(rèn)真負(fù)責(zé),實(shí)事求是的科學(xué)作風(fēng)。
2.檢驗(yàn)人員要經(jīng)常學(xué)習(xí)、吸收先進(jìn)檢驗(yàn)技術(shù),掌握各種檢驗(yàn)理論和方法,熟悉各種實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)及注意事項(xiàng),掌握常用儀器的原理、性能、構(gòu)造、使用和維護(hù)。
3.操作前做好檢驗(yàn)項(xiàng)目、樣品和送檢單的核對。認(rèn)真按照實(shí)驗(yàn)規(guī)程操作,保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確。
4.檢驗(yàn)工作經(jīng)常接觸有毒、有害、有傳染性的樣品,檢驗(yàn)人員要嚴(yán)格執(zhí)行各種操作規(guī)程,做好防護(hù),加強(qiáng)消毒。
(二)樣品的采集、送檢和處理
1.采樣
(1)檢驗(yàn)人員負(fù)責(zé)現(xiàn)場采樣工作,并做好采樣調(diào)查記錄,無采樣記錄的樣品,不得接受檢驗(yàn)。
(2)采取細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的樣品,應(yīng)按無菌操作規(guī)程進(jìn)行,并加強(qiáng)自身防護(hù)及防止病原菌傳播。
(3)采取數(shù)量以能反映被檢物的衛(wèi)生質(zhì)量和檢驗(yàn)項(xiàng)目對樣品的需求為準(zhǔn)。
(4)采取的樣品,呆具有代表性、均勻性。均質(zhì)樣品用3層5點(diǎn)方法采取;涂抹標(biāo)本應(yīng)多點(diǎn)采樣;各種水樣不少于1000毫升;尸體標(biāo)本應(yīng)在死后6小時(shí)內(nèi)采取。
2.送檢
(1)樣品必須貼上標(biāo)簽,做到嚴(yán)密封閉包裝,注意安全,避免傾斜或破碎,盡快送檢。
(2)送檢樣品必須注明檢驗(yàn)?zāi)康?,樣品的來源、名稱、件數(shù)、重量,采樣條件和時(shí)間,送檢時(shí)間、送檢人姓名和單位及需要說明的其他事項(xiàng)。
(3)染疫動物送檢時(shí)要有防蚤設(shè)施;易腐敗樣品如不能立即送檢,應(yīng)加以冷藏;特殊樣品應(yīng)放在保存液中運(yùn)送。
(4)收到樣品后,及時(shí)核對登記,并盡快進(jìn)行檢驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)錯(cuò)誤立即與送檢人協(xié)商,采取彌補(bǔ)措施。
3.樣品的保存和處理
(1)重要檢驗(yàn)的樣品或不易采集的樣品,應(yīng)保存一定數(shù)量,以備復(fù)查。
(2)不能立即檢驗(yàn)的樣品,應(yīng)按要求妥善保存,防止污染、腐敗。
(3)檢驗(yàn)完的微生物學(xué)樣品,經(jīng)當(dāng)事檢驗(yàn)者同意,采取適當(dāng)方法消毒處理后,方可遺棄。
(4)樣品在檢驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)保留一定時(shí)間,以備復(fù)查。陽性樣品至少保存6個(gè)月,應(yīng)加封存放,防止變質(zhì)。易變質(zhì)食品及時(shí)處理。
(5)樣品最后處理,必須經(jīng)處(科)室領(lǐng)導(dǎo)同意后進(jìn)行。
(三)檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告
1.填寫報(bào)告
(1)檢驗(yàn)結(jié)束后,應(yīng)及時(shí)填寫檢驗(yàn)報(bào)告單和檢驗(yàn)記錄。
(2)檢驗(yàn)報(bào)告應(yīng)按檢驗(yàn)報(bào)告單的要求,逐項(xiàng)如實(shí)填寫。病因檢查結(jié)果用“檢出”、“未檢出”;實(shí)驗(yàn)結(jié)果用“陽性”、“陰性”。測定量數(shù)值,在定值中只保留一位可疑數(shù)字,有效數(shù)位數(shù)確定后,用“四舍五入”取舍規(guī)則定最后一位數(shù)。
2.簽發(fā)、復(fù)核報(bào)告
(1)一般檢驗(yàn)報(bào)告由檢驗(yàn)者簽發(fā),重要檢驗(yàn)報(bào)告須經(jīng)主管檢驗(yàn)負(fù)責(zé)人復(fù)核后簽發(fā)。
(2)報(bào)告結(jié)論應(yīng)客觀真實(shí)。發(fā)現(xiàn)檢疫傳染病或監(jiān)測傳染玻灸病原體時(shí),應(yīng)按國家規(guī)定的初步檢驗(yàn)報(bào)告和確診檢驗(yàn)報(bào)告的時(shí)限及時(shí)簽發(fā)檢驗(yàn)報(bào)告。
(四)精密儀器的管理和使用
1.新購進(jìn)的儀器要認(rèn)真檢查,應(yīng)由專人負(fù)責(zé)登記造冊,建立儀器管理、使用檔案。
2.嚴(yán)格按照操作規(guī)程使用儀器。熟練掌握儀器使用方法。
3.儀器要安全、靈敏,保持清潔,定期維修。做到防塵、防曬、防潮、防腐蝕。
4.建立儀器使用制度,大型精密儀器由專人專室使用和維護(hù)保養(yǎng)。
5.除有專業(yè)人員外,不得拆卸儀器,發(fā)現(xiàn)故障時(shí),應(yīng)立即停止使用并請有關(guān)人員檢修。
(五)藥品、試劑的保管使用
1.劇毒、危險(xiǎn)藥品的保管
(1)劇毒及危險(xiǎn)藥品要包裝嚴(yán)密,標(biāo)簽清晰,設(shè)專柜存放,加鎖,由專人管理。做好出入登記,經(jīng)常檢查核實(shí)。發(fā)放藥品應(yīng)認(rèn)真核對。
(2)藥品應(yīng)按其性質(zhì)分別排列存放,存放地點(diǎn)要按公安消防部門的要求制定安全防范措施。
2.試劑配制的要求
(1)試劑配制方法所需的藥品,應(yīng)達(dá)到檢驗(yàn)要求的純度。
(2)試劑配制方法必須按操作規(guī)程進(jìn)行,如采用新方法配制試劑,須經(jīng)主管檢驗(yàn)負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)后,方可進(jìn)行。
(3)新配制的試劑必須進(jìn)行核對鑒定,合格后方可使用。
(4)試劑的標(biāo)簽一律用鋼筆書寫,注明試劑的名稱、濃度、配制時(shí)間及有效期限。注意防止標(biāo)簽脫落。
(5)怕光試劑應(yīng)放在棕色瓶中。經(jīng)常檢查試劑,發(fā)現(xiàn)變質(zhì),立即更換。
(六)檢驗(yàn)質(zhì)量控制
檢驗(yàn)使用的方法必須靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢出率高、漏檢率低。要經(jīng)常總結(jié)經(jīng)驗(yàn),解決疑難問題,推廣新技術(shù),應(yīng)用新方法。要有完整的檢驗(yàn)記錄,作為質(zhì)量檢查的依據(jù)。
1.實(shí)驗(yàn)必須按實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行;
2.實(shí)驗(yàn)器材和儀器設(shè)備在使用前必須經(jīng)過校正;
3.使用標(biāo)準(zhǔn)試劑做實(shí)驗(yàn)對照;
4.標(biāo)準(zhǔn)試劑必須符合實(shí)驗(yàn)要求,并注意生產(chǎn)單位、批號及有效期;
5.檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)準(zhǔn)確無誤;
6.按規(guī)定的方法計(jì)算檢驗(yàn)結(jié)果;
7.檢驗(yàn)報(bào)告必須按簽發(fā)、復(fù)核規(guī)定及時(shí)發(fā)出;
8.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的質(zhì)量控制應(yīng)定期進(jìn)行。
衛(wèi)檢總監(jiān)字〔1989〕第235號 1989年12月6日)
為加強(qiáng)國境衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)工作,使其科學(xué)化、規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化,我們組織有關(guān)專業(yè)人員,整理了《國境衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)方法》和制定了《國境衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)規(guī)程》(試行),現(xiàn)發(fā)給你們參照執(zhí)行。望總結(jié)經(jīng)驗(yàn)并將執(zhí)行過程中遇到的問題和改進(jìn)意見及時(shí)報(bào)總所。
國境衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)方法
目錄
一、健康檢查檢驗(yàn)方法
(一)ABO血型檢驗(yàn)方法
(二)谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢驗(yàn)方法
(三)乙肝表面抗原檢驗(yàn)方法
(四)食品飲用水從業(yè)人員帶菌檢查檢驗(yàn)方法
(五)腹瀉病病原體檢驗(yàn)方法
(六)紅細(xì)胞沉降率檢驗(yàn)方法
二、禁止入境的傳染病檢驗(yàn)方法
(一)梅毒血清抗體檢驗(yàn)方法
(二)淋病雙球菌檢驗(yàn)方法
(三)結(jié)核桿菌檢驗(yàn)方法
(四)麻瘋桿菌檢驗(yàn)方法
(五)艾滋病血清抗體檢驗(yàn)方法(HIV檢驗(yàn)方法)
三、檢疫傳染病檢驗(yàn)方法
(一)鼠疫耶爾森氏菌檢驗(yàn)方法
(二)霍亂弧菌檢驗(yàn)方法
(三)黃熱病病毒檢驗(yàn)方法
四、監(jiān)測傳染病檢驗(yàn)方法
(一)流感病毒檢驗(yàn)方法
(二)瘧原蟲檢驗(yàn)方法
(三)斑疹傷寒立克次體檢驗(yàn)方法
(四)回歸熱螺旋體檢驗(yàn)方法
(五)登革熱病毒檢驗(yàn)方法
(六)流行性出血熱病毒檢驗(yàn)方法
(七)脊髓灰質(zhì)炎病毒檢驗(yàn)方法
(八)天花病毒檢驗(yàn)方法
(九)埃波拉馬爾堡病毒檢驗(yàn)方法
(十)拉沙熱病毒檢驗(yàn)方法
(十一)軍團(tuán)菌檢驗(yàn)方法
五、食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法和標(biāo)準(zhǔn)(詳見《中華人民共和國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》)
(一)糧食衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(二)食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(三)鮮肉衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(四)凍肉衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(五)咸肉衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(六)熟肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(七)鮮蛋衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(八)加工蛋制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(九)乳及乳制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十)茶類衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十一)糖類衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十二)糕點(diǎn)、餅干、面包衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十三)冷飲食品及汽酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十四)罐頭衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十五)水產(chǎn)品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十六)調(diào)味品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十七)醬腌菜衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十八)豆制品及淀粉類衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(十九)蒸餾酒及配制酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(二十)發(fā)酵酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(二十一)食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(二十二)食品中氟允許量標(biāo)準(zhǔn)
(二十三)食品中鎘允許量標(biāo)準(zhǔn)
(二十四)食品總砷、無機(jī)砷允許量標(biāo)準(zhǔn)
(二十五)食品中汞允許量標(biāo)準(zhǔn)
(二十六)糧食、蔬菜、肉、蛋等食品中“六六六”、“滴滴涕”衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(二十七)食品中甲拌磷、希螟硫磷、倍硫磷殘留量衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
(二十八)食品中敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對硫磷允許殘留標(biāo)準(zhǔn)
(二十九)食品中黃曲霉毒素B1允許量標(biāo)準(zhǔn)
(三十)熏烤動物性食品中苯并芘允許限量標(biāo)準(zhǔn)
(三十一)食具容器包裝材料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
六、餐茶具衛(wèi)生檢驗(yàn)方法
七、生活飲用水衛(wèi)生要求
八、食品貯藏衛(wèi)生要求
九、環(huán)境衛(wèi)生要求
(一)污水排放衛(wèi)生要求
(二)空氣衛(wèi)生要求
(三)餐茶具洗滌消毒衛(wèi)生要求
(四)供水設(shè)備衛(wèi)生要求
一、健康檢查檢驗(yàn)方法
(一)ABO血型檢驗(yàn)方法
1、方法
玻片凝集法
標(biāo)準(zhǔn)血清系指用抗A抗B單克隆標(biāo)準(zhǔn)抗血清
2、結(jié)果判定
────────────┬───────────────────────
標(biāo)準(zhǔn)血清 │ 凝集現(xiàn)象
────────────┼───────────────────────
抗A │+ - ?。 。?/p>
抗B │- ?。 。 。?/p>
受檢者血型 │A B AB O
────────────┴───────────────────────
?。。撸撸撸撸撸撸撸撸撸撸撸撸摺?-不凝集
────────────────────────────────────
(二)谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢驗(yàn)方法
1 方法
GPT賴氏法
2 結(jié)果判定
────────────┬───────────────────────
方法 │正常值
────────────┼───────────────────────
賴氏法 │0-25單位
────────────┴───────────────────────
(三)乙型肝炎表面抗原檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
1.2 反向間接血凝反應(yīng)(RPHA)
2 結(jié)果判定
───┬────────────────────┬───────────
方法 │ 血球凝集反應(yīng) │
├────────────────────┤結(jié)果判定
│1:2 1:4 1:8 1:8以上│
───┼────────────────────┼───────────
反向間│++↑ ++↑ ?。?uarr; ++↑ │陽性(++)
接血凝│++↑ ?。?uarr; ?。?uarr; +↓ │可疑(+-)
反應(yīng) │++↑ ?。?uarr; +↓ ?。 々﹃幮裕ǎ?/p>
───┴────────────────────┴───────────
+凝集 ↑以上 ↓以下
必要時(shí)作中和試驗(yàn)
────────┬────────────────┬──────────
方法 │ 判定方法 │結(jié)果判定
────────┼────────────────┼──────────
酶聯(lián)免吸附試驗(yàn) │目測:棕黃色 │陽性
│比色: │≥2.1:陽性
│ 樣品OD值 │<2.1:陰性
│PN=─────────────│
│ 陰性對照平均OD值 │
────────┴────────────────┴──────────
(四)食品飲用水從業(yè)人員帶菌檢查檢驗(yàn)方法
1 項(xiàng)目
霍亂弧菌、志賀氏菌、沙門氏菌
2 方法
增菌,分離培養(yǎng),生化學(xué)、血清學(xué)鑒定
3 結(jié)果
不得檢出
(五)腹瀉病病原體檢驗(yàn)方法
1 項(xiàng)目
霍亂弧菌、志賀氏菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌、致病性大腸桿菌、侵襲性大腸桿菌、產(chǎn)毒性大腸桿菌、空腸彎曲菌、結(jié)腸炎耶爾森氏菌、輪狀病毒
2 方法
增菌、分離、培養(yǎng)、鑒定
3 結(jié)果
檢出××病原體;××病原體未檢出。
(六)紅細(xì)胞沉降率檢驗(yàn)方法
1 方法
魏氏法
2 結(jié)果判定
────────┬───────────────────────────
方法 │正常檢驗(yàn)指標(biāo)
────────┼───────────────────────────
魏氏法 │男性 0-15mm/H
│女性 0-20mm/H
────────┴───────────────────────────
二、禁止入境的傳染病檢驗(yàn)方法
(一)梅毒血清抗體檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 血清反應(yīng)素試驗(yàn)(USR)
1.2 梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)(TPHA)
1.3 熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)(FTA-ABS)
2 結(jié)果判定
2.1 USR
────────────────────────────────────
反應(yīng)程度 結(jié)果判定
────────────────────────────────────
中等或大的塊狀物 陽性反應(yīng)(++)↑
顆粒不規(guī)則細(xì)小粒狀 弱陽性反應(yīng)(+-)
均勻分布無塊狀物 陰性反應(yīng)(-)
────────────────────────────────────
2.2 TPHA
────────────────────────────────────
陽性 ?。?:80
可疑 1:80(+-)需復(fù)驗(yàn)
陰性 <1:80
────────────────────────────────────
2.3 FTA-ABS
────────────────────────────────────
熒光強(qiáng)度 結(jié)果判定
────────────────────────────────────
翠綠色熒光(++)↑ 陽性
黃綠色熒光(+) 可疑
熒光不顯(+-) 陰性
────────────────────────────────────
健康檢查USR陽性時(shí),需做TPHA,陽性時(shí)才能確診。
(二)淋病雙球菌檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 直接涂片染色鏡檢
1.2 分離培養(yǎng)
1.3 生化試驗(yàn)鑒定
2 結(jié)果判定
2.1 形態(tài)特點(diǎn):卵圓形或圓形,成對排列常位于細(xì)胞中。
2.2 菌落半透明灰白色邊緣花瓣?duì)睢?/p>
2.3 生化試驗(yàn):過氧化氫酶,氧化酶陽性葡萄糖產(chǎn)酸即可判定。
(三)結(jié)核桿菌檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 直接涂片抗酸染色鏡檢
1.2 分離培養(yǎng)
1.3 動物試驗(yàn)
2 結(jié)果判定
2.1 檢出抗酸性菌。
2.2 3-4周生長粗糙型菌落為陽性。
2.3 動物試驗(yàn)3-4周接種部位附近淋巴結(jié)腫大為陽性。
(四)麻瘋桿菌檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 直接涂片抗酸染色鏡檢100個(gè)視野
1.2 動物試驗(yàn)
1.3 麻瘋菌素反應(yīng)
2 結(jié)果判定
2.1 鏡檢結(jié)果
2.1.1 陰性(-):檢查100個(gè)視野無麻瘋桿菌。
2.1.2 陽性(+):每個(gè)視野查到1個(gè)或<1個(gè)麻瘋桿菌。
2.1.3 陽性(++):每個(gè)視野均可查到麻瘋桿菌。
2.1.4 陽性(+++):每個(gè)視野均可查到許多麻瘋桿菌。
2.2 動物試驗(yàn):豚鼠接種不發(fā)病。
2.3 麻瘋菌素反應(yīng):出現(xiàn)紅斑>10mm為陽性。
(五)艾滋病血清抗體檢驗(yàn)方法
1 項(xiàng)目
HIV抗體檢測
2 方法
2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
2.2 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
2.3 明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)
2.4 蛋白印跡試驗(yàn)(WB)
3 結(jié)果判定
3.1 ELISA:OD值≥cOT OFF值表示有反應(yīng),應(yīng)復(fù)驗(yàn)1次,如重復(fù)陽性,可認(rèn)為HIV抗體陽性。
3.2 IFA:細(xì)胞漿和細(xì)胞膜呈綠色熒光為陽性。
3.3 PA:
────────────────────────────────────
陽性(+) 1:32 發(fā)生顆粒凝集
可疑(+-) ?。?:32 顆粒凝集不顯
陰性(-) 均不發(fā)生凝集反應(yīng)
────────────────────────────────────
3.4 WB:出現(xiàn)P24或GP41帶形,同時(shí)出現(xiàn)其他帶形,為陽性,即可確診。
三、檢疫傳染病檢驗(yàn)方法
(一)鼠疫耶爾森氏菌檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 涂片鏡檢
1.2 分離培養(yǎng)鑒定
1.3 噬菌體試驗(yàn)
1.4 動物試驗(yàn)
1.5 沉淀反應(yīng)
1.6 被動血凝試驗(yàn)
1.7 反向血凝試驗(yàn)
1.8 抗體中和試驗(yàn)
1.9 免疫熒光檢查
2 結(jié)果報(bào)告
2.1 初報(bào):2小時(shí)內(nèi)涂片染色報(bào)告。
2.2 疑似報(bào)告:36小時(shí)內(nèi)報(bào)告形態(tài)、血清學(xué)試驗(yàn)、噬菌體試驗(yàn)結(jié)果。
2.3 最終報(bào)告:初發(fā)鼠疫于72小時(shí)內(nèi)經(jīng)四步檢查結(jié)果報(bào)告。
(二)霍亂弧菌檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 涂片、染色
1.2 動力觀察及制動試驗(yàn)
1.3 分離培養(yǎng)
1.4 生化試驗(yàn)
1.5 血清學(xué)試驗(yàn)
1.5.1 玻片凝集試驗(yàn)
1.5.2 試管定量凝集試驗(yàn)
1.6 噬菌體試驗(yàn)
2 結(jié)果報(bào)告
2.1 初報(bào):涂片形態(tài)動力觀察制動試驗(yàn)2小時(shí)內(nèi)報(bào)告。
2.2 疑似報(bào)告:增菌培養(yǎng)狀況,玻片凝集試驗(yàn)10小時(shí)內(nèi)報(bào)告。
2.3 初步鑒定:結(jié)合形態(tài)、培養(yǎng)性狀,18小時(shí)內(nèi)報(bào)告。
2.4 確定報(bào)告:根據(jù)鑒定試驗(yàn)、鑒別試驗(yàn),48小時(shí)內(nèi)報(bào)告。
(三)黃熱病病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 病毒分離
1.1.1 動物接種
1.1.2 雞胚接種
1.1.3 組織培養(yǎng)
1.2 血清學(xué)試驗(yàn)
1.2.1 抗體中和試驗(yàn)
1.2.2 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)
1.2.3 血凝及血凝抑制試驗(yàn)
1.3 病理組織切片
2 結(jié)果判定
2.1 初步鑒定報(bào)告:動物試驗(yàn),血清學(xué)試驗(yàn)呈陽性反應(yīng),中和指數(shù)>50。雙份血清滴度增高4倍以上。
2.2 最終確定報(bào)告:分離病毒,傳代實(shí)驗(yàn)動物的血清學(xué)試驗(yàn)及病理組織學(xué)切片檢查結(jié)果。
四、監(jiān)測傳染病檢驗(yàn)方法
(一)流感病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 病毒分離
1.1.1 雞胚接種
1.1.2 組織培養(yǎng)
1.2 血清學(xué)試驗(yàn)
1.2.1 血凝及血凝抑制試驗(yàn)
1.2.2 紅細(xì)胞吸附及吸附抑制試驗(yàn)
1.2.3 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)
1.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
1.3 免疫熒光抗體快速診斷
2 結(jié)果判定
2.1 快速診斷:直接涂片熒光染色,熒光細(xì)胞3個(gè)以上為陽性,1至2個(gè)為可疑,無特異熒光為陰性。
2.2 分離出病毒,用已知標(biāo)準(zhǔn)免疫血清確定甲、乙、丙三型和亞型。
2.3 血清學(xué)試驗(yàn):雙份血清抗體滴度比增長4倍為陽性。ELISA雙份血清滴度比增長4倍為陽性。ELISA雙份血清滴度比值的負(fù)對數(shù)ED值>0.5為陽性,<0.1為陰性。
(二)瘧原蟲檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 涂片鏡檢
1.2 血清學(xué)試驗(yàn)
1.2.1 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)
1.2.2 被動血凝試驗(yàn)
1.2.3 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
1.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
2 結(jié)果判定
2.1 涂片找到各期瘧原蟲,應(yīng)報(bào)告發(fā)育時(shí)期及瘧原蟲的種類。
2.2 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)形成白色沉淀線為陽性。
2.3 標(biāo)準(zhǔn)瘧原蟲抗原致敏血球,與被測血清所凝集為陽性。
2.4 免疫熒光陽性:呈明亮熒光。
2.5 ELISA陽性:形成復(fù)合物而顯黃棕色。
(三)斑疹傷寒立克次氏體檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 直接檢查法
1.1.1 姬氏染色法
1.1.2 免疫熒光染色
1.2 病原體分離
1.2.1 豚鼠接種
1.2.2 雞胚接種
1.3 血清學(xué)試驗(yàn)
1.3.1 外斐氏反應(yīng)
1.3.2 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)
1.3.3 間接血凝試驗(yàn)
1.3.4 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
2 結(jié)果判定
2.1 鏡檢:立克次體短小、單個(gè)、成雙或成堆紅色,熒光染色呈黃綠色熒光。
2.2 豚鼠呈發(fā)熱反應(yīng),直接檢查可查立克次體,臟器懸液為抗原做血清反應(yīng),呈陽性。
2.3 雞胚卵黃囊膜涂片,可查出立克次體。
2.4 血清學(xué)試驗(yàn):雙份血清滴度增高4倍以上為陽性。外斐氏反應(yīng)>1:160有診斷意義,補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)>1:8,間接血凝試驗(yàn)>1:400,間接免疫熒光試驗(yàn)呈綠色熒光顆粒為陽性。
(四)回歸熱螺旋體檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 直接檢查
1.2 染色鏡檢
1.3 動物接種
1.4 雞胚接種
2 結(jié)果判定
───────────┬────────────────────────
方法 │ 結(jié)果判定
───────────┼────────────────────────
鏡檢 │發(fā)現(xiàn)有柔軟長絲狀,具有5-7個(gè)不規(guī)則疏松螺旋體
雞胚或動物接種 │發(fā)現(xiàn)有螺旋體生長
───────────┴────────────────────────
(五)登革熱病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 病毒分離
1.1.1 乳鼠接種
1.2 中和試驗(yàn)
1.3 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)
1.4 血凝抑制試驗(yàn)
2 結(jié)果判定
────────┬───────────────────────────
方法 │ 結(jié)果判定
────────┼───────────────────────────
中和試驗(yàn) │單份血清中和指數(shù)>50為陽性
補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) │效價(jià)≥1:32為陽性,恢復(fù)期血清比急性期血清增長4倍。
血凝抑制試驗(yàn) │效價(jià)≥1:2560為陽性,恢復(fù)期比急性期血清增長4倍。
────────┴───────────────────────────
(六)流行性出血熱檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 間接免疫熒光試驗(yàn)
1.2 血凝抑制試驗(yàn)
2 結(jié)果判定
2.1 間接免疫熒光:血清滴加抗原片上出現(xiàn)翠綠色熒光顆粒為陽性。
(七)脊髓灰質(zhì)炎病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 病毒分離
1.1.1 動物接種
1.1.2 組織培養(yǎng)
1.2 血清學(xué)試驗(yàn)
1.2.1 中和試驗(yàn)
1.2.2 ELISA
1.3 免疫熒光法快速診斷
2 結(jié)果判定
2.1 小白鼠接種:出現(xiàn)典型癥狀或有規(guī)律死亡為陽性。
2.2 組織培養(yǎng):病變(++)細(xì)胞>50%為陽性。
2.3 中和試驗(yàn):雙份血清滴度增長4倍。
2.4 ELISA:界限值P/N>2為陽性。
2.5 快速診斷:DFA:陽性時(shí)胞漿中呈彌散性翠綠色熒光,部分顆粒性,有的呈大球形熒光包涵體。
(八)天花病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 涂片鏡檢
1.2 病毒分離
1.2.1 雞胚接種
1.2.2 動物試驗(yàn)
1.3 血清學(xué)試驗(yàn)
1.3.1 絮狀沉淀試驗(yàn)
1.3.2 血凝抑制試驗(yàn)
1.3.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
2 結(jié)果判定
2.1 鏡檢:天花病毒原生小體大量存在,判定為陽性。
2.2 雞胚接種:痘斑試驗(yàn)陽性,絨毛尿囊膜有白點(diǎn)病灶。
2.3 動物試驗(yàn):鮑氏試驗(yàn)陽性,家兔角膜吳透明小圓泡炎癥變化。
2.4 血清學(xué)試驗(yàn):雙份血清滴度增高4倍,絮狀沉淀試驗(yàn):呈現(xiàn)絮狀沉淀為陽性。
(九)埃波拉馬爾堡病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 病毒分離
1.1.1 動物接種
1.1.2 組織培養(yǎng)
1.2 血清學(xué)試驗(yàn)
1.2.1 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
2 結(jié)果判定
2.1 動物試驗(yàn):小白鼠、豚鼠、猴皆能發(fā)病。
2.2 VERO單層細(xì)胞:陽性時(shí)細(xì)胞病變病毒生長。
2.3 IFA:血清抗體陽性,出現(xiàn)翠綠色熒光顆粒。
2.4 ELISA:界限值P/N>2為陽性。
(十)拉沙熱病毒檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 病毒分離
1.1.1 動物接種
1.1.2 組織培養(yǎng)
1.2 血清學(xué)試驗(yàn)
1.2.1 中和試驗(yàn)
1.2.2 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
1.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
2 結(jié)果判定
2.1 動物試驗(yàn):小白鼠4日后發(fā)病死亡。
2.2 組織培養(yǎng):VERO-E6細(xì)胞產(chǎn)生病變,單個(gè)細(xì)胞壞死,分布不均,呈巢穴狀。
2.3 中和試驗(yàn):小白鼠中和指數(shù)<9為陰性,>50為陽性。雙份血清明顯增長。蝕斑抑制中和試驗(yàn):蝕斑減少>80%為陽性。
2.4 IFA:陽性時(shí)在細(xì)胞漿內(nèi)呈點(diǎn)狀顆粒狀熒光,或分布在核內(nèi)。
2.5 ELISA:界限值P/N>2為陽性。
(十一)軍團(tuán)菌檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 涂片鏡檢
1.2 分離培養(yǎng)
1.3 動物接種
1.4 血清學(xué)試驗(yàn)
1.4.1 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
1.4.2 微量凝集試驗(yàn)(MAT)
1.4.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
2 結(jié)果判定
2.1 姬美耐染色:菌體為紅色,鍍銀染色呈黑棕色,多形性桿菌狀,多數(shù)在吞噬細(xì)胞內(nèi)。DFA染色呈亮綠熒光。
2.2 CO2中培養(yǎng)5天,灰白、濕潤、有光澤、質(zhì)軟菌落,產(chǎn)褐色素,明膠液化,水解馬尿酸,氧化酶陽性。
2.3 血清學(xué)試驗(yàn):雙份血清呈4倍增長,≥1:128為陽性,MAT抗體滴度>1:16為陽性。ELISA校正OD值≥0.3為陽性。
六、餐茶具衛(wèi)生檢驗(yàn)方法
1 方法
1.1 濾紙貼附法
1.2 生理鹽水洗滌、涂擦法
2 項(xiàng)目與指標(biāo)
────────────┬───────────────────────
項(xiàng)目 │ 指標(biāo)
────────────┼───────────────────────
細(xì)菌總數(shù) │<20個(gè)/平方厘米
大腸菌群 │不得檢出/50平方厘米
────────────┴───────────────────────
七、生活飲用水衛(wèi)生要求
1 項(xiàng)目
1.1 感官性狀
1.2 細(xì)菌學(xué)檢查
1.3 理化檢查
2 水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)和衛(wèi)生要求
────────────┬───────────────────────
項(xiàng)目 │ 標(biāo)準(zhǔn)
────────────┼───────────────────────
1.感官性狀和一般化學(xué) │
指標(biāo): │
色 │色度不超過15度,并不得呈現(xiàn)其它異色
混濁度 │不超過3度,特殊情況不超過5度
溴和味 │不得有異嗅、異味
肉眼可見物 │不得含有
PH │6.5-8.5
總硬度 │450mG/L
?。ㄒ蕴妓徕}計(jì)) │
鐵 │0.3mG/L
錳 │0.1mG/L
銅 │1.0mG/L
鋅 │1.0mG/L
揮發(fā)酚類 │0.002mG/L
(以苯酚計(jì)) │
陽離子合成洗滌劑 │0.3mG/L
硫酸鹽 │250mG/L
氯化物 │250mG/L
溶解性總固體 │1000mG/L
2.毒理學(xué)指標(biāo): │
氟化物 │1.0mG/L
氰化物 │0.05mG/L
砷 │0.05mG/L
硒 │0.01mG/L
汞 │0.001mG/L
鎘 │0.01mG/L
鉻(六價(jià)) │0.05mG/L
鉛 │0.05mG/L
銀 │0.05mG/L
硝酸鹽(以氮計(jì)) │20mG/L
氯仿 │60UG/L
四氯化碳 │3UG/L
苯并(A)芘 │0.01UG/L
滴滴涕 │1UG/L
六六六 │5UG/L
3.細(xì)菌學(xué)指標(biāo): │
細(xì)菌總數(shù) │小于100個(gè)/mL
總大腸菌群 │小于3個(gè)/L
游離余氯 │末梢水不應(yīng)低于0.05mG/L在接觸30分鐘
│后不低于0.3mG/L
4.放射性指標(biāo): │
總α放射性 │0.1Bq/L
總β放射性 │1Bq/L
────────────┴───────────────────────
八、食品貯藏衛(wèi)生要求
1 項(xiàng)目
1.1 溫度
1.2 濕度
2 溫、濕度指標(biāo)
────────────┬───────────────────────
項(xiàng)目 │ 指標(biāo)
────────────┼───────────────────────
冷凍食品:溫度 │-10―-12℃
相對濕度 │85%-92%
魚肉暫存:溫度 │0-3℃
相對濕度 │85%-88%
蛋品:溫度 │1-3℃
相對濕度 │85%-88%
水果、蔬菜:溫度 │7-10℃
相對濕度 │85%-95%
牛乳 │5-7℃
糧油干貨 │陰涼干燥,溫度最高允許28℃
消毒后食品,開罐食品、 │5-7℃
牛乳及熟食品 │
────────────┴───────────────────────
九、環(huán)境衛(wèi)生檢驗(yàn)要求
(一)污水排放衛(wèi)生要求
────────────┬───────────────────────
項(xiàng)目 │ 指標(biāo)
────────────┼───────────────────────
五日生化需氧量 │ ≤ 50
懸浮物 │ ≤ 150
大腸菌群 │ ≤ 250個(gè)/100mL
────────────┴───────────────────────
(二)空氣衛(wèi)生要求
────────────────────────────────────
項(xiàng)目 指標(biāo)
────────────────────────────────────
二氧化碳(mG/立方米) ≤0.15
一氧化碳(mG/立方米) ≤10
細(xì)菌總數(shù)(個(gè)/立方米)
夏季 ≤4500
冬季 ≤6000
甲、乙鏈球菌(個(gè)/立方米) ≤36
────────────────────────────────────
(三)餐茶具洗滌消毒衛(wèi)生要求
────────────────────────────────────
項(xiàng)目 指標(biāo)
────────────────────────────────────
蒸汽柜溫度 77℃ 15分
91℃ 5分
洗滌熱水溫度 >77℃
洗手水溫度 43-49℃
────────────────────────────────────
(四)供水設(shè)備衛(wèi)生要求
每月消毒一次,游離余氯0.2PPm,不少于20分。
國境衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)規(guī)程
(試行)
一、檢驗(yàn)工作任務(wù)和內(nèi)容
檢驗(yàn)工作是衛(wèi)生檢疫一項(xiàng)技術(shù)性很強(qiáng)的工作。其主要任務(wù)是:為檢疫查驗(yàn)、傳染病監(jiān)測、衛(wèi)生監(jiān)督、衛(wèi)生處理、隔離、留驗(yàn)、醫(yī)療急救等工作及時(shí)、準(zhǔn)確地提供檢驗(yàn)結(jié)果和監(jiān)測數(shù)據(jù),為衛(wèi)生檢疫工作提供科學(xué)依據(jù)。
檢驗(yàn)工作的主要內(nèi)容:
(一)負(fù)責(zé)現(xiàn)場樣品采集工作,及時(shí)檢驗(yàn),報(bào)告檢驗(yàn)結(jié)果以及簽發(fā)檢驗(yàn)單證。
(二)對檢疫傳染病和監(jiān)測傳染玻救各種病原體微生物進(jìn)行分離和鑒定。
(三)地國境口岸和入出境交通工具上的食品、飲用水進(jìn)行細(xì)菌學(xué)和理化檢驗(yàn)。
(四)負(fù)責(zé)國境口岸的醫(yī)學(xué)動物所帶病原體的分離和鑒定。
(五)負(fù)責(zé)健康檢查的檢驗(yàn)工作。
(六)負(fù)責(zé)國境口岸的醫(yī)療急救及門診的臨床檢驗(yàn)工作。
(七)負(fù)責(zé)進(jìn)口食品檢驗(yàn)工作。
(八)開展有關(guān)疾病監(jiān)測、衛(wèi)生監(jiān)督和衛(wèi)生處理等科學(xué)研究工作。
二、實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度
(一)微生物實(shí)驗(yàn)室
1.設(shè)無菌接種室、培養(yǎng)基制作室、洗滌消毒室、微生物檢查室等。
2.室內(nèi)光線要充足,空氣流通,溫、濕度適宜,安靜清潔,無蚊、無蠅。
3.實(shí)驗(yàn)室出入口放置腳擦墊,用消毒液浸泡,進(jìn)入室內(nèi)必須穿白大衣,戴白帽,換拖鞋,作好自身防護(hù)。
4.遵守各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程,操作危險(xiǎn)活菌應(yīng)在固定地點(diǎn)進(jìn)行,臺面要鋪好浸泡消毒溢的紗布墊,工作完畢將紗布墊浸泡在消毒液中,并消毒洗手。
5.吸取標(biāo)本必須用有橡皮吸頭、塞有棉花的無菌吸管,用過的吸管放在消毒液中。
6.用過的染菌器材和污物經(jīng)滅菌處理后,方可遺棄。
7.打破染菌器材時(shí),應(yīng)迅速采取適當(dāng)消毒措施,對污染點(diǎn)進(jìn)行消毒,并向領(lǐng)導(dǎo)報(bào)告。
8.需要保留的菌種,應(yīng)按菌種保管要求妥善保存。不得隨意送出。
(二)強(qiáng)毒菌檢驗(yàn)室
1.強(qiáng)毒菌檢驗(yàn)室,應(yīng)有嚴(yán)格的防鼠、防蚤設(shè)施。
2.強(qiáng)毒菌檢驗(yàn)必須雙人操作,檢驗(yàn)人員要穿好防護(hù)服裝。
3.已知毒菌種的動物接種、解剖或菌種密封,檢驗(yàn)人員要戴有機(jī)玻璃面罩或眼鏡。
4.工作完畢后,檢驗(yàn)人員必須做終末消毒,方準(zhǔn)離開實(shí)驗(yàn)室。
(三)病毒檢驗(yàn)室
1.設(shè)有隔離的實(shí)驗(yàn)室,一切有污染性的實(shí)驗(yàn)應(yīng)在指定實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。
2.進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿工作服、換鞋。操作中所用材料和器械必須就地進(jìn)行消毒處理,實(shí)驗(yàn)完畢作終末消毒后,方準(zhǔn)離開實(shí)驗(yàn)室。
3.實(shí)驗(yàn)室必須安裝紫外線消毒設(shè)備,實(shí)驗(yàn)前后均用紫外線照射30分鐘以上。
4.發(fā)生病毒污染時(shí),立即采取有效措施進(jìn)行處理,并向領(lǐng)導(dǎo)匯報(bào)。
(四)理化檢驗(yàn)室
1.設(shè)化學(xué)分析室、儀器分析室、秤量室等。要求清潔整齊,溫、濕度適宜。
2.定量器材在使用前應(yīng)按規(guī)定進(jìn)行清洗、校正,試劑的純度符合檢驗(yàn)要求。
3.劇毒、易燃、易爆品應(yīng)專人保管,防止發(fā)生事故。
4.要嚴(yán)格按操作規(guī)程使用儀器,定期對儀器進(jìn)行維修檢查。
5.測定樣品時(shí),必須做平等實(shí)驗(yàn),取平均值計(jì)算報(bào)告。
(五)臨床檢驗(yàn)室
1.室內(nèi)保持清潔安靜。操作嚴(yán)肅認(rèn)真,按操作規(guī)程進(jìn)行。
2.采血時(shí),要態(tài)度和藹,動作輕快,注意安全。
3.檢驗(yàn)報(bào)告,應(yīng)按規(guī)定時(shí)間發(fā)出。急診報(bào)告優(yōu)先發(fā)出。
4.發(fā)現(xiàn)重要意義的檢驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)立即通知體檢工作人員,以便及時(shí)處理,并向領(lǐng)導(dǎo)匯報(bào)。
(六)免疫檢驗(yàn)室
1.室內(nèi)光線充足,溫、濕度適宜,有足夠電源插座。
2.實(shí)驗(yàn)應(yīng)選擇特異性強(qiáng)、靈敏度高的特異性診斷血清、試劑盒的方法。
3.血清、免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)存在多種干擾因素,易出現(xiàn)假陽性,必要時(shí)進(jìn)行復(fù)驗(yàn)
,并進(jìn)一步做確證實(shí)驗(yàn)。
4.洗滌血球一定要洗滌三次。血球上清液不得有溶血跡象,補(bǔ)體使用時(shí)在做正式實(shí)驗(yàn)同時(shí),必須做補(bǔ)體效價(jià)滴定。
5.實(shí)驗(yàn)用的玻璃器材需仔細(xì)選擇,選用中性、硬質(zhì)玻璃器材,能耐酸、耐高溫、透明度強(qiáng),以利于觀察結(jié)果。
(七)動物實(shí)驗(yàn)室
1.實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)由專職人員進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)、繁殖。室內(nèi)應(yīng)保持清潔整齊和適宜溫、濕度,無鼠、無蚊、無蠅。
2.選擇符合實(shí)驗(yàn)要求的純種、健康動物,進(jìn)行單獨(dú)飼養(yǎng),嚴(yán)格消毒,隔離及檢疫。
3.動物實(shí)驗(yàn)必須按照實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程或?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行。
4.實(shí)驗(yàn)動物要進(jìn)行分組編號,標(biāo)記在不易脫落、明顯的部位。實(shí)驗(yàn)動物用的容器應(yīng)有明顯的標(biāo)簽,每天核對動物數(shù)目,如有減少,查明原因并及時(shí)處理。
5.實(shí)驗(yàn)用過的動物,不準(zhǔn)放回動物飼養(yǎng)室。
(八)病媒昆蟲實(shí)驗(yàn)室
1.設(shè)飼養(yǎng)室和標(biāo)本制作鑒定室,室內(nèi)應(yīng)有嚴(yán)格的防鼠、防蚤措施,防止其他昆蟲侵入室內(nèi)。
2.飼養(yǎng)室應(yīng)設(shè)有恒溫、恒濕裝置。備有遮光用的黑布窗簾。飼養(yǎng)器應(yīng)充足,固定專用。
3.飼養(yǎng)室有給水設(shè)備,給水必須隔夜脫氯,但不能超過兩天以上,殺蟲劑及其他揮發(fā)性藥物均不得攜入飼養(yǎng)室內(nèi)。
4.要詳細(xì)填寫飼養(yǎng)記錄,并注明飼養(yǎng)條件。
5.標(biāo)本制作鑒定室應(yīng)溫度適宜、干燥,光線充足。標(biāo)本有防霉、防蟲措施。定期檢查標(biāo)本情況。
(九)毒理實(shí)驗(yàn)室
1.室內(nèi)應(yīng)清潔整齊,無蠅、無鼠,發(fā)現(xiàn)鼠類禁用毒餌除鼠。進(jìn)入室內(nèi)要穿工作服。
2.實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)選擇標(biāo)準(zhǔn)動物,選用標(biāo)準(zhǔn)飼料。一次實(shí)驗(yàn)用全程飼料,備齊后方可開始實(shí)驗(yàn)。
3.應(yīng)按實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行毒理學(xué)實(shí)驗(yàn),選用的方法靈敏、可靠。
4.實(shí)驗(yàn)動物容器應(yīng)備有卡片,標(biāo)明編號、分類編目、記錄進(jìn)程和實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。
5.實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)按有標(biāo)準(zhǔn)毒物、無標(biāo)準(zhǔn)毒物及未知毒物等分類,認(rèn)真觀察,每天詳細(xì)填寫實(shí)驗(yàn)記錄。
6.毒理實(shí)驗(yàn)樣品應(yīng)注意驗(yàn)收、保存和使用。樣品中不得混有化學(xué)藥物和防腐劑。易變質(zhì)樣品應(yīng)及時(shí)冰凍、冷藏保存。
三、檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程
(一)檢驗(yàn)人員的管理
1.檢驗(yàn)工作是科學(xué)性很強(qiáng)的工作,從事檢驗(yàn)工作的人員要具有一定的政治和業(yè)務(wù)素質(zhì)及認(rèn)真負(fù)責(zé),實(shí)事求是的科學(xué)作風(fēng)。
2.檢驗(yàn)人員要經(jīng)常學(xué)習(xí)、吸收先進(jìn)檢驗(yàn)技術(shù),掌握各種檢驗(yàn)理論和方法,熟悉各種實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)及注意事項(xiàng),掌握常用儀器的原理、性能、構(gòu)造、使用和維護(hù)。
3.操作前做好檢驗(yàn)項(xiàng)目、樣品和送檢單的核對。認(rèn)真按照實(shí)驗(yàn)規(guī)程操作,保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確。
4.檢驗(yàn)工作經(jīng)常接觸有毒、有害、有傳染性的樣品,檢驗(yàn)人員要嚴(yán)格執(zhí)行各種操作規(guī)程,做好防護(hù),加強(qiáng)消毒。
(二)樣品的采集、送檢和處理
1.采樣
(1)檢驗(yàn)人員負(fù)責(zé)現(xiàn)場采樣工作,并做好采樣調(diào)查記錄,無采樣記錄的樣品,不得接受檢驗(yàn)。
(2)采取細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的樣品,應(yīng)按無菌操作規(guī)程進(jìn)行,并加強(qiáng)自身防護(hù)及防止病原菌傳播。
(3)采取數(shù)量以能反映被檢物的衛(wèi)生質(zhì)量和檢驗(yàn)項(xiàng)目對樣品的需求為準(zhǔn)。
(4)采取的樣品,呆具有代表性、均勻性。均質(zhì)樣品用3層5點(diǎn)方法采取;涂抹標(biāo)本應(yīng)多點(diǎn)采樣;各種水樣不少于1000毫升;尸體標(biāo)本應(yīng)在死后6小時(shí)內(nèi)采取。
2.送檢
(1)樣品必須貼上標(biāo)簽,做到嚴(yán)密封閉包裝,注意安全,避免傾斜或破碎,盡快送檢。
(2)送檢樣品必須注明檢驗(yàn)?zāi)康?,樣品的來源、名稱、件數(shù)、重量,采樣條件和時(shí)間,送檢時(shí)間、送檢人姓名和單位及需要說明的其他事項(xiàng)。
(3)染疫動物送檢時(shí)要有防蚤設(shè)施;易腐敗樣品如不能立即送檢,應(yīng)加以冷藏;特殊樣品應(yīng)放在保存液中運(yùn)送。
(4)收到樣品后,及時(shí)核對登記,并盡快進(jìn)行檢驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)錯(cuò)誤立即與送檢人協(xié)商,采取彌補(bǔ)措施。
3.樣品的保存和處理
(1)重要檢驗(yàn)的樣品或不易采集的樣品,應(yīng)保存一定數(shù)量,以備復(fù)查。
(2)不能立即檢驗(yàn)的樣品,應(yīng)按要求妥善保存,防止污染、腐敗。
(3)檢驗(yàn)完的微生物學(xué)樣品,經(jīng)當(dāng)事檢驗(yàn)者同意,采取適當(dāng)方法消毒處理后,方可遺棄。
(4)樣品在檢驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)保留一定時(shí)間,以備復(fù)查。陽性樣品至少保存6個(gè)月,應(yīng)加封存放,防止變質(zhì)。易變質(zhì)食品及時(shí)處理。
(5)樣品最后處理,必須經(jīng)處(科)室領(lǐng)導(dǎo)同意后進(jìn)行。
(三)檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告
1.填寫報(bào)告
(1)檢驗(yàn)結(jié)束后,應(yīng)及時(shí)填寫檢驗(yàn)報(bào)告單和檢驗(yàn)記錄。
(2)檢驗(yàn)報(bào)告應(yīng)按檢驗(yàn)報(bào)告單的要求,逐項(xiàng)如實(shí)填寫。病因檢查結(jié)果用“檢出”、“未檢出”;實(shí)驗(yàn)結(jié)果用“陽性”、“陰性”。測定量數(shù)值,在定值中只保留一位可疑數(shù)字,有效數(shù)位數(shù)確定后,用“四舍五入”取舍規(guī)則定最后一位數(shù)。
2.簽發(fā)、復(fù)核報(bào)告
(1)一般檢驗(yàn)報(bào)告由檢驗(yàn)者簽發(fā),重要檢驗(yàn)報(bào)告須經(jīng)主管檢驗(yàn)負(fù)責(zé)人復(fù)核后簽發(fā)。
(2)報(bào)告結(jié)論應(yīng)客觀真實(shí)。發(fā)現(xiàn)檢疫傳染病或監(jiān)測傳染玻灸病原體時(shí),應(yīng)按國家規(guī)定的初步檢驗(yàn)報(bào)告和確診檢驗(yàn)報(bào)告的時(shí)限及時(shí)簽發(fā)檢驗(yàn)報(bào)告。
(四)精密儀器的管理和使用
1.新購進(jìn)的儀器要認(rèn)真檢查,應(yīng)由專人負(fù)責(zé)登記造冊,建立儀器管理、使用檔案。
2.嚴(yán)格按照操作規(guī)程使用儀器。熟練掌握儀器使用方法。
3.儀器要安全、靈敏,保持清潔,定期維修。做到防塵、防曬、防潮、防腐蝕。
4.建立儀器使用制度,大型精密儀器由專人專室使用和維護(hù)保養(yǎng)。
5.除有專業(yè)人員外,不得拆卸儀器,發(fā)現(xiàn)故障時(shí),應(yīng)立即停止使用并請有關(guān)人員檢修。
(五)藥品、試劑的保管使用
1.劇毒、危險(xiǎn)藥品的保管
(1)劇毒及危險(xiǎn)藥品要包裝嚴(yán)密,標(biāo)簽清晰,設(shè)專柜存放,加鎖,由專人管理。做好出入登記,經(jīng)常檢查核實(shí)。發(fā)放藥品應(yīng)認(rèn)真核對。
(2)藥品應(yīng)按其性質(zhì)分別排列存放,存放地點(diǎn)要按公安消防部門的要求制定安全防范措施。
2.試劑配制的要求
(1)試劑配制方法所需的藥品,應(yīng)達(dá)到檢驗(yàn)要求的純度。
(2)試劑配制方法必須按操作規(guī)程進(jìn)行,如采用新方法配制試劑,須經(jīng)主管檢驗(yàn)負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)后,方可進(jìn)行。
(3)新配制的試劑必須進(jìn)行核對鑒定,合格后方可使用。
(4)試劑的標(biāo)簽一律用鋼筆書寫,注明試劑的名稱、濃度、配制時(shí)間及有效期限。注意防止標(biāo)簽脫落。
(5)怕光試劑應(yīng)放在棕色瓶中。經(jīng)常檢查試劑,發(fā)現(xiàn)變質(zhì),立即更換。
(六)檢驗(yàn)質(zhì)量控制
檢驗(yàn)使用的方法必須靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢出率高、漏檢率低。要經(jīng)常總結(jié)經(jīng)驗(yàn),解決疑難問題,推廣新技術(shù),應(yīng)用新方法。要有完整的檢驗(yàn)記錄,作為質(zhì)量檢查的依據(jù)。
1.實(shí)驗(yàn)必須按實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行;
2.實(shí)驗(yàn)器材和儀器設(shè)備在使用前必須經(jīng)過校正;
3.使用標(biāo)準(zhǔn)試劑做實(shí)驗(yàn)對照;
4.標(biāo)準(zhǔn)試劑必須符合實(shí)驗(yàn)要求,并注意生產(chǎn)單位、批號及有效期;
5.檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)準(zhǔn)確無誤;
6.按規(guī)定的方法計(jì)算檢驗(yàn)結(jié)果;
7.檢驗(yàn)報(bào)告必須按簽發(fā)、復(fù)核規(guī)定及時(shí)發(fā)出;
8.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的質(zhì)量控制應(yīng)定期進(jìn)行。
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